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      省人民醫院院檢驗中心開展核酸反向斑點雜交技術

      作者: 2014-08-20 09:16:00 來源:浏覽量:

       省人民醫院院檢驗中心開展核酸反向斑點雜交技術

          反向斑點雜交是利用生物素等標記的探針與特異性擴增PCR産物(DNA序列)雜交的新型技術。此項技術一次雜交就可以判斷某一基因座位的大部分或全部等位基因,廣泛用于基因分型、病原體檢測、腫瘤研究等。爲滿足臨床和患者需要,我院檢驗中心全自動核酸分子雜交儀將于20148月正式投入使用,現將開展項目介紹如下:

      一、丙型肝炎病毒(HCV)基因分型

      開展丙型肝炎病毒(HCV)基因分型,應用反向斑點雜交技術檢測中國常見的1b2a3a3b6a五種亞型。不同的HCV亞型與病程發展和治療應答相關,根據分型判定治療的難易,制定對應的抗病毒治療個體化方案。不同亞型感染引起臨床過程與幹擾素,利巴韋林的治療反應與治療用量不同。

      1、臨床意義

      1HCV基因分布存在著地理、人群差異,因此當HCV在人群中爆發時,基因分型可作爲追查其根源的有效工具。HCV 主要傳播途徑是直接與患者血液接觸,通過對不同人群HCV分子學研究,使包括垂直傳播與性傳播在內的HCV其他傳播途徑受到廣泛關注,並證實HCV可在結腸鏡檢查時于患者一患者問傳播。

      2HCV 感染的診斷通過對獻血員檢測血清中抗HCV抗體進行篩選,是目前阻止HCV傳播的主要方法,但這種篩選的成敗關鍵依賴于不同分離株問序列變異的程度。

      3)感染了HCV 後,絕大多數(80)患者不能自行清除,而發展爲慢性肝炎。研究基因分型在急性感染轉變成慢性HCV中的作用,發現921b型急性感染患者會進展爲慢性化,而其他類型僅35~50%。而這一現象已成爲研究的焦點。

      4HCV基因分型與肝髒疾病嚴重程度的關系目前尚無定論。有文獻報道認爲,在慢性HCV 患者中,lb 型的肝髒病變較其它類型更嚴重,患者比其它分型的患者年齡大,而且比其它分型早出現,認爲HCV lbHCV肝髒病變嚴重,是因爲它存在著較長的感染期,而非對肝髒具有更強的破壞。

      5)对幹擾素治疗的应答: 自從發現HCV以来,对预测幹擾素长期应答相关因素的发现是一重大贡献。多项临床研究表明,对α-幹擾素抗病毒治疗应答性有影响的常见因素包括年龄、病程、肝硬化、基因型和HCV RNA血清水平。多元分析表明lb型、高水平的HCV RNA是唯一對α-幹擾素治疗无应答的独立性预测因子。普通幹擾素治疗24周,2型的患者對于擾素的完全應答占60-70%,而1型患者僅占10-15%。

      2、適用科室

      適用于丙型肝炎病毒感染患者的各臨床科室。

      3、標本采集要求

          真空幹燥采血管(生化管),采集患者靜脈血3-4mlHCV-RNA熒光定量檢測結果>1x103),2h內送檢;48h4-8保存。

      4HIS系統提交方式

           丙型肝炎病毒(HCV)基因分型。

      二、人乳頭瘤病毒(HPV)基因分型

      開展人乳頭瘤病毒(HPV)基因分型,定性並分型檢測宮頸脫落細胞樣本和生殖泌尿道分泌物中人乳頭瘤病毒(HPV)常見的28個基因型別,包括:15 種高危型別:1618313335394551525658596873,82(MM4)種疑似高危型別:26536610 種低危型別:61140424344546181(cp8304)83(MM7)

      1、臨床意義

      人乳頭瘤病毒系空泡病毒A屬,是球形DNA病毒,能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。表現爲尋常、生殖器疣(尖銳濕疣)等症狀。 隨著性病中尖銳濕疣的发病率急速上升和宮頸癌、肛門癌等的增多,人乳頭瘤病毒感染越來越引起人們的關注。目前已分離出130多種亞型,其中40多种与宮頸癌发病相关。因此,有针对性地进行HPV 的分型檢測,對于HPV的临床诊断和宮頸癌的早期预防有重要的意义,可广泛用于临床诊断和女性体检。   

      2、適用科室

       適用于人乳頭瘤病毒感染患者的各臨床科室。

      3、標本采集要求

      1適用標本類型:宮頸脫落細胞樣本和生殖泌尿道分泌物。

      2受檢需知:月經正常婦女,在月經來潮後1018 天为最佳检查时间;检查前不要做阴道冲洗,不要在阴道內用药物;检查前24 小时內最好避免性生活。

      3)標本采集:

      宮頸樣本:醫護人員先用窺陰器或陰道張開器暴露宮頸,用宮頸刷置于宮頸口,順時針旋轉4周以獲取足量的上皮細胞,然後取出宮頸刷置于盛有2ml 生理鹽水的無菌小試管中備檢。若樣本黏液過多或者含血量過多應該盡量重新取樣。

      女性尿道樣本:首先使用無菌生理鹽水棉球洗淨尿道口,再用棉拭子插入尿道約2CM,然後撚動拭子,最後將拭子放入細胞保存液中,密閉送檢。采集尿道樣本時,受檢者必須在采集前個小時禁止小便。

      男性尿道樣本:取尿道分泌物或使用細小的尿道拭子,插入男性尿道2-4CM,然後撚動尿道拭子取出分泌物,最後將尿道拭子放入細胞保存液中,密閉送檢。

      標本應立即用于測試,4保存不應超過個星期, -20保存不應超過個月。

      4HIS系統提交方式

           人乳頭瘤病毒基因分型。

      三、送檢地點及聯系方式

      1. 檢測地點:門診七樓檢驗中心分子生物實驗室。

       2. 聯系電話:0931-8281223


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